Prelude SPLC on-line mintaelőkészítő rendszer

Az on-line mintaelőkészítő rendszerek általában a kétdimenziós folyadékkromatográfia elvén alapulnak, ahol az extrakció az első, míg a kromatográfiás elválasztás a második dimenzióban történik meg.

Így a Prelude rendszer is tartalmaz hat darab fecskendőpumpát, csatornánként hármat, egy automata mintaadagolót, váltószelepeket és oszloptermosztátot. A rendszer két csatornás, multiplex, négy elválasztó oszlopot üzemeltet, két mintaelőkészítést végző TurboFlow oszlopot és két analitikai folyadékkromatográfiás oszlopot. Az online mintaelőkészítőt és a tömegspektrométert egyaránt az Xcalibur szoftver, valamint az integrált Aria OS szoftver vezérli.

TurboFlow mintaelőkészítő oszlop: méretkizárás és kémiai retenció

A mintaelőkészítés a Thermo Scientific által szabadalmaztatott TurboFlow oszlopon történik meg, turbulens áramlási körülmények közt, olyan kombinált elválasztással, amely méretkizárást és kémiai megkötést egyaránt tartalmaz. Az oszlop belső felülete kötött állófázissal borított, amelynek polaritása az apoláris felülettől a poláris felületig az analitikai feladat szerint megválasztható. Az oszlop hatékonyan elválasztja a nagy molekulatömegű mátrixot a kis molekulatömegű célvegyülettől.

A TurboFlow oszlop nagy részecskeméretű töltetén (>30 µm) a nagy áramlási sebesség (0,5-5 ml/perc) turbulens áramlási feltételeket hoz létre, így a tömegátvitel hatékonyabbá válik. Amennyiben a mintaelőkészítés után további elválasztásra vagy fókuszálásra van szükség az analitikai feladat során, úgy az a rendszer második, hagyományos analitikai HPLC oszlopán történik meg. A 100%-os vizes puffer eluens alkalmazásakor a kis gyógyszermolekulák a részecskék pórusaiba diffundálnak és ott megkötődnek, a biológiai mátrix nagy molekulatömegű komponensei, a méretkizárás elve alapján, retenció nélkül haladnak át az oszlopon. A vizsgálandó vegyületet a TurboFlow oszlopról az analitikai oszlopra a mintahurokban lévő oldószer segítségével eluálódik. A mintahurok térfogata legalább tízszerese kell legyen a TurboFlow oszlop térfogatának és általában fordított fázisú elválasztás esetén  szerves eluens, ioncsere esetén adott kémhatású puffer-oldat. A TurboFlow oszlopról eluált molekulák fókuszálódnak a HPLC oszlop elején, majd az analitikai oszlopon megtörtént elválasztás után a mennyiségi mérés a hármas kvadrupol tömegspektrométerben történik meg.

Keresztszennyezés és a visszanyerési százalék a mintaelőkészítés során

Az on-line mintaelőkészítő rendszerek megbízhatóságának szűk keresztmetszete a keresztszennyezés és a visszanyerési százalék lehet. Az automata mintaadagoló Dynamic Load and Wash opcióval, a keresztszennyezés nem haladja meg a 0,003%-ot vagy 30 ppm-et. Ez a kialakítás lehetővé teszi, hogy a minta nem érintkezik az injektáló fecskendővel. A visszanyerési százalék az analitikai feladat függvényében 90 % körüli érték.